Fc Silent™ représente un domaine Fc génétiquement modifié développé chez Absolute Antibody pour la recherche et le développement de tests. Il contient des mutations ponctuelles clés qui abrogent la liaison des récepteurs Fc (FcγR, FcR), abolissant la fonction effectrice de la cytotoxicité dirigée par les anticorps (ADCC).
Nos anticorps Fc Silent™ permettent donc aux chercheurs de supprimer la fonction effectrice in vivo et de réduire le fond non spécifique dans les méthodes de coloration. In vivo, les anticorps bénéficient de la longue demi-vie plasmatique (t1/2) associée au domaine Fc, sans aucun des mécanismes effecteurs immunitaires cytolytiques associés au domaine Fc de type sauvage. In vitro, les anticorps peuvent être utilisés pour des applications de cytométrie en flux et d’immunohistochimie (IHC) afin de réduire le signal de fond non spécifique résultant de la liaison des récepteurs Fc. Les mutations Fc Silent™ n’affectent pas les autres propriétés de l’anticorps, notamment leur compatibilité avec les anticorps secondaires.
Tous les anticorps et protéines de fusion Absolute Antibody sont disponibles avec le domaine Fc Silent™. Notre catalogue de réactifs comprend des domaines Fc Silent™ spécifiques à chaque espèce, comme l’homme, la souris, le lapin, le rat et le hamster, en stock et prêts à être achetés. Si vous ne voyez pas l’anticorps de votre choix au format Fc Silent™, contactez-nous – nous serons heureux de le produire pour vous !
Pour plus d’informations sur l’impact des récepteurs Fc sur la fonction effectrice ou sur les efforts d’ingénierie des Fc, consultez notre Ressource anticorps, une ressource de référence en ligne gratuite pour les chercheurs.
Données de liaison Fc Silent™
Les isotypes IgG2a de souris et IgG2b de rat sont connus pour se lier fortement aux récepteurs Fc, indépendamment de la spécificité de l’anticorps testé. Des contrôles d’isotype sont employés pour permettre au chercheur de distinguer les signaux de fond spécifiques et non spécifiques. Dans la figure 1, nous montrons comment les macrophages murins sont marqués presque aussi fortement par un contrôle d’isotype IgG2b de rat que par un anti-F4/80. Le passage aux anticorps Fc Silent™ permet d’obtenir des données fiables avec une coloration de fond indiscernable d’un contrôle par anticorps secondaire seul. Cela montre également que les anticorps Fc Silent™ sont compatibles avec les anticorps secondaires standard.
La figure 2 utilise la résonance plasmonique de surface (SPR) et l’ELISA d’inhibition compétitive directe pour montrer que le format Fc Silent™ n’interagit pas avec les récepteurs Fc murins ou humains. Ces données ont été fournies par le Dr Stephen Beers de l’Université de Southampton.
Figure 1. Cytométrie en flux de BMDMs colorés avec des anticorps anti-F4/80 de type sauvage (A) et Fc Silent™ (B) (Ab00106-8.1 et Ab00106-8.4) et des anticorps de contrôle isotypiques, suivis d’un anticorps secondaire anti-rats de chèvre conjugué par fluorescence. L’utilisation de Fc Silent™ abolit la coloration non spécifique induite par les FcγR, rendant les données plus propres et plus précises. Cliquez ici pour plus d’informations.
Figure 2A et B. Sensogramme montrant la liaison des anticorps monoclonaux IgG2a anti-F4/80 de type sauvage de souris et Fc Silent™ (Ab00106-2.0 et Ab00106-2.3, respectivement) à des récepteurs Fcγ immobilisés de souris à faible et haute affinité (CD16, CD16-2, CD32, CD64). L’analyse de liaison SPR Biacore montre que l’anticorps Fc Silent™ a perdu sa capacité à interagir avec les récepteurs Fc de la souris.
Figure 2C et D. Sensogramme montrant la liaison des anticorps monoclonaux anti-F4/80 de rat de type sauvage et Fc Silent™ (Ab00106-8.1 et Ab00106-8.4, respectivement) aux récepteurs Fcγ de souris immobilisés de faible et de haute affinité (CD16, CD16-2, CD32, CD64). L’analyse de liaison SPR Biacore montre que l’anticorps Fc Silent™ a perdu sa capacité à interagir avec les récepteurs Fc de souris.
Figure 2E. ELISA d’inhibition compétitive directe. 2µg/ml/puits de récepteur FcγR1 recombinant humain (rCD64) ont été absorbés sur une plaque à 96 puits. 40µg/ml d’Alemtuzumab biotinylé (Campath) ont été mélangés avec des anticorps monoclonaux murins de type sauvage ou Fc Silent™ anti-F4/80 IgG2a non marqués et dilués en série (Ab00106-2.0 ou Ab00106-2.3, respectivement) ou de l’Alemtuzumab (Campath ; contrôle positif). Les données montrent clairement que l’anticorps Fc Silent™, Ab00106-2.3, ne se lie pas au récepteur Fc humain.
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