Fc Silent™ representa un dominio Fc modificado genéticamente desarrollado en Absolute Antibody para la investigación y el desarrollo de ensayos. Contiene mutaciones puntuales clave que anulan la unión de los receptores Fc (FcγR, FcR), aboliendo la función efectora de la citotoxicidad dirigida por anticuerpos (ADCC).
Nuestros anticuerpos Fc Silent™ permiten, por tanto, a los investigadores eliminar la función efectora in vivo y reducir el fondo no específico en los métodos de tinción. In vivo, los anticuerpos se benefician de la larga vida media plasmática (t1/2) asociada al dominio Fc, sin ninguno de los mecanismos efectores inmunitarios citolíticos asociados al dominio Fc de tipo salvaje. In vitro, los anticuerpos pueden utilizarse para aplicaciones de citometría de flujo e inmunohistoquímica (IHC) para reducir la señal de fondo no específica resultante de la unión del receptor Fc. Las mutaciones Fc Silent™ no afectan a otras propiedades del anticuerpo, incluida su compatibilidad con anticuerpos secundarios.
Todos los anticuerpos y proteínas de fusión de Absolute Antibody están disponibles con el dominio Fc Silent™. Nuestro catálogo de reactivos incluye dominios Fc Silent™ específicos para cada especie, como el humano, el de ratón, el de conejo, el de rata y el de hámster, en stock y listos para comprar. Si no ve el anticuerpo de su elección en el formato Fc Silent™, póngase en contacto con nosotros: ¡estaremos encantados de producirlo para usted!
Para obtener más información sobre el impacto de los receptores Fc en la función efectora o los esfuerzos de ingeniería Fc, consulte nuestro Recurso de anticuerpos, un recurso de referencia en línea gratuito para los investigadores.
Datos de unión a Fc Silent™
Se sabe que los isotipos IgG2a de ratón e IgG2b de rata se unen fuertemente a los receptores Fc independientemente de la especificidad del anticuerpo de prueba. Los controles de isotipo se emplean para permitir al investigador distinguir entre señales de fondo específicas y no específicas. En la Figura 1, mostramos cómo los macrófagos murinos son marcados casi tan fuertemente por un control de isotipo IgG2b de rata como por un anti-F4/80. Al cambiar a los anticuerpos Fc Silent™ se obtienen datos fiables con una tinción de fondo indistinguible de un control de sólo anticuerpos secundarios. Esto también demuestra que los anticuerpos Fc Silent™ son compatibles con los anticuerpos secundarios estándar.
La figura 2 utiliza la resonancia de plasmón de superficie (SPR) y el ELISA de inhibición competitiva directa para mostrar que el formato Fc Silent™ no interactúa con los receptores Fc murinos o humanos. Estos datos fueron proporcionados por el Dr. Stephen Beers de la Universidad de Southampton.
Figura 1. Citometría de flujo de BMDMs teñidas con anticuerpos de tipo salvaje (A) y Fc Silent™ (B) anti-F4/80 (Ab00106-8.1 y Ab00106-8.4) y anticuerpos de control de isotipo, seguidos de un anticuerpo secundario anti-cabra conjugado fluorescentemente. El uso de Fc Silent™ suprime la tinción no específica impulsada por el FcγR, haciendo que los datos sean más limpios y precisos. Haga clic aquí para obtener más información.
Figura 2A y B. Sensograma que muestra la unión de los anticuerpos monoclonales anti-F4/80 IgG2a de ratón de tipo salvaje y Fc Silent™ (Ab00106-2.0 y Ab00106-2.3, respectivamente) a receptores Fcγ inmovilizados de ratón de baja y alta afinidad (CD16, CD16-2, CD32, CD64). El análisis de unión SPR de Biacore muestra que el anticuerpo Fc Silent™ ha perdido su capacidad de interactuar con los receptores Fc de ratón.
Figura 2C y D. Sensograma que muestra la unión de los anticuerpos monoclonales anti-F4/80 de tipo salvaje de rata y Fc Silent™ (Ab00106-8.1 y Ab00106-8.4, respectivamente) a los receptores Fcγ de baja y alta afinidad de ratón inmovilizados (CD16, CD16-2, CD32, CD64). El análisis de unión SPR de Biacore muestra que el anticuerpo Fc Silent™ ha perdido su capacidad de interactuar con los receptores Fc de ratón.
Figura 2E. ELISA de inhibición competitiva directa. Se absorbieron 2µg/ml/pozo de receptor FcγR1 recombinante humano (rCD64) en una placa de 96 pocillos. Se premezclaron 40µg/ml de alemtuzumab biotinilado (Campath) con anticuerpos monoclonales murinos de tipo salvaje o Fc Silent™ anti-F4/80 IgG2a (Ab00106-2.0 o Ab00106-2.3, respectivamente) o alemtuzumab (Campath; control positivo) sin marcar. Los datos muestran claramente que el anticuerpo Fc Silent™, Ab00106-2.3, no se une al receptor Fc humano.