Fc Silent™ representa um domínio Fc geneticamente modificado desenvolvido em Absolute Antibodies para investigação e desenvolvimento de ensaios. Contém mutações de pontos-chave que ab-rogam a ligação dos receptores Fc (FcγR, FcR), abolindo a função effector de citotoxicidade dirigida por anticorpos (ADCC).
O nosso Fc Silent™ anticorpos permite assim aos investigadores remover a função effector in vivo e reduzir o fundo não específico nos métodos de coloração. In vivo, os anticorpos beneficiam da semi-vida longa do plasma (t1/2) associada ao domínio Fc, sem nenhum dos mecanismos de efeito imunitário citolítico associados ao domínio Fc do tipo selvagem. In vitro, os anticorpos podem ser utilizados para aplicações de citometria de fluxo e imunohistoquímica (IHC) para reduzir o sinal de fundo não específico resultante da ligação do receptor Fc. As mutações Fc Silent™ não afectam outras propriedades do anticorpo, incluindo a sua compatibilidade com anticorpos secundários.
Todos os anticorpos de anticorpos absolutos e proteínas de fusão estão disponíveis com o domínio Fc Silent™. O nosso catálogo de reagentes inclui domínios Fc Silent™ específicos de espécies, tais como humanos, ratos, coelhos, ratos e hamsters, em stock e prontos a comprar. Se não vir o seu anticorpo de escolha no formato Fc Silent™, contacte-nos – teremos todo o prazer em produzi-lo para si!
Para mais informações sobre o impacto dos receptores Fc na função effector ou nos esforços de engenharia Fc, consulte o nosso Recurso Anticorpos, um recurso de referência online gratuito para investigadores.
Fc Silent™ Dados Vinculativos
Isótipos IgG2a do rato e IgG2b do rato são conhecidos por se ligarem fortemente aos receptores Fc, independentemente da especificidade dos anticorpos de teste. São utilizados controlos de isótipos para permitir ao investigador distinguir entre sinais de fundo específicos e não específicos. Na Figura 1, mostramos como os macrófagos murinos são rotulados quase tão fortemente por um controlo de isótipos IgG2b de ratazana como por um anti-F4/80. Mudando para Fc Silent™ os anticorpos resultam em dados fiáveis com uma coloração de fundo indistinguível de um controlo secundário apenas anticorpo. Isto também mostra que os anticorpos Fc Silent™ são compatíveis com anticorpos secundários padrão.
Figure 2 usa ressonância plasmónica de superfície (SPR) e inibição competitiva directa ELISA para mostrar que o formato Fc Silent™ não interage com receptores Fc murinos ou humanos. Estes dados foram fornecidos pelo Dr. Stephen Beers na Universidade de Southampton.
Figure 1. Citometria de fluxo de BMDMs corados com anticorpos secundários tipo selvagem (A) e Fc Silent™ (B) anti-F4/80 (Ab00106-8.1 e Ab00106-8.4) e anticorpos de controlo de isótipos, seguidos de anticorpos secundários anti-ratos de cabra conjugados fluorescentemente. A utilização de Fc Silent™ elimina a coloração não específica FcγR, tornando os dados mais limpos e precisos. Clique aqui para mais informações.
Figure 2A e B. Sensogram mostrando ligação do tipo selvagem do rato e Fc Silent™ anti-F4/80 IgG2a anticorpos monoclonais (Ab00106-2.0 e Ab00106-2.3, respectivamente) para receptores imobilizados de baixa e alta afinidade do rato Fcγ (CD16, CD16-2, CD32, CD64). A análise de ligação Biacore SPR mostra que o anticorpo Fc Silent™ perdeu a sua capacidade de interagir com os receptores Fc do rato.
Figure 2C e D. Sensogram mostrando ligação de anticorpos monoclonais do tipo selvagem do rato e Fc Silent™ anti-F4/80 (Ab00106-8.1 e Ab00106-8.4, respectivamente) a receptores Fcγ imobilizados de baixa e alta afinidade do rato (CD16, CD16-2, CD32, CD64). A análise de ligação Biacore SPR mostra que o anticorpo Fc Silent™ perdeu a sua capacidade de interagir com os receptores Fc do rato.
Figure 2E. Inibição competitiva directa ELISA. 2µg/ml/poço de recombinante humano FcγR1 receptor (rCD64) foi absorvido para uma placa de 96 poços. 40µg/ml de Alemtuzumab biotinilado (Campath) foi pré-misturado com murino tipo selvagem não rotulado e diluído em série ou Fc Silent™ anti-F4/80 IgG2a anticorpos monoclonais (Ab00106-2.0 ou Ab00106-2.3, respectivamente) ou Alemtuzumab (Campath; controlo positivo). Os dados mostram claramente que o anticorpo Fc Silent™, Ab00106-2.3, não se liga ao receptor Fc humano.