Fc Silent™ rappresenta un dominio Fc geneticamente modificato sviluppato da Absolute Antibody per la ricerca e lo sviluppo di test. Contiene mutazioni puntiformi chiave che abrogano il legame dei recettori Fc (FcγR, FcR), abolendo la funzione di citotossicità diretta agli anticorpi (ADCC).
I nostri anticorpi Fc Silent™ consentono quindi ai ricercatori di rimuovere la funzione effettrice in vivo e di ridurre lo sfondo aspecifico nei metodi di colorazione. In vivo, gli anticorpi beneficiano della lunga emivita plasmatica (t1/2) associata al dominio Fc, senza nessuno dei meccanismi citolitici dell’effettore immunitario associati al dominio Fc wild-type. In vitro, gli anticorpi possono essere utilizzati per applicazioni di citometria a flusso e immunoistochimica (IHC) per ridurre il segnale di fondo non specifico risultante dal legame del recettore Fc. Le mutazioni Fc Silent™ non influenzano le altre proprietà dell’anticorpo, compresa la compatibilità con gli anticorpi secondari.
Tutti gli anticorpi e le proteine di fusione Absolute Antibody sono disponibili con il dominio Fc Silent™. Il nostro catalogo di reagenti comprende domini Fc Silent™ specie-specifici, come quello umano, del topo, del coniglio, del ratto e del criceto, in stock e pronti all’acquisto. Se non vedi il tuo anticorpo di scelta nel formato Fc Silent™, contattaci – saremo felici di produrlo per te!
Per ulteriori informazioni sull’impatto dei recettori Fc sulla funzione effettrice o sugli sforzi di ingegneria Fc, controlla la nostra Antibody Resource, una risorsa di riferimento online gratuita per i ricercatori.
Dati di legame Fc Silent™
Gli isotipi IgG2a di topo e IgG2b di ratto sono noti per legarsi fortemente ai recettori Fc indipendentemente dalla specificità dell’anticorpo di prova. I controlli dell’isotipo sono impiegati per consentire al ricercatore di distinguere tra segnali di fondo specifici e non specifici. Nella Figura 1, mostriamo come i macrofagi murini sono etichettati quasi altrettanto fortemente da un controllo isotipo IgG2b di ratto come da un anti-F4/80. Passando a Fc Silent ™ risultati anticorpi in dati affidabili con colorazione di fondo indistinguibile da un controllo secondario-anticorpo solo. Questo dimostra anche che gli anticorpi Fc Silent™ sono compatibili con gli anticorpi secondari standard.
La figura 2 utilizza la risonanza plasmonica di superficie (SPR) e l’inibizione competitiva diretta ELISA per mostrare che il formato Fc Silent™ non interagisce con i recettori Fc murini o umani. Questi dati sono stati forniti dal Dr. Stephen Beers dell’Università di Southampton.
Figura 1. Citometria a flusso di BMDMs colorati con wild-type (A) e Fc Silent™ (B) anti-F4/80 (Ab00106-8.1 e Ab00106-8.4) e anticorpi di controllo isotipo, seguiti da anticorpo secondario di capra anti-ratto coniugato fluorescentemente. L’utilizzo di Fc Silent™ abolisce la colorazione non specifica guidata da FcγR, rendendo i dati più puliti e accurati. Clicca qui per maggiori informazioni.
Figura 2A e B. Sensogramma che mostra il legame degli anticorpi monoclonali topo wild-type e Fc Silent™ anti-F4/80 IgG2a (Ab00106-2.0 e Ab00106-2.3, rispettivamente) ai recettori Fcγ di topo immobilizzati a bassa e alta affinità (CD16, CD16-2, CD32, CD64). Biacore SPR analisi di legame mostra che l’anticorpo Fc Silent ™ ha perso la sua capacità di interagire con i recettori Fc del mouse.
Figura 2C e D. Sensogramma che mostra il legame di ratto wild-type e Fc Silent ™ anti-F4/80 anticorpi monoclonali (Ab00106-8.1 e Ab00106-8.4, rispettivamente) per immobilizzato topo bassa e alta affinità Fcγ recettori (CD16, CD16-2, CD32, CD64). L’analisi di legame SPR Biacore mostra che l’anticorpo Fc Silent™ ha perso la sua capacità di interagire con i recettori Fc del topo.
Figura 2E. Inibizione competitiva diretta ELISA. 2µg/ml/pozzetto di recettore FcγR1 ricombinante umano (rCD64) è stato assorbito su una piastra a 96 pozzetti. 40µg/ml di Alemtuzumab biotinilato (Campath) è stato premiscelato con anticorpi monoclonali murini wild-type o Fc Silent™ anti-F4/80 IgG2a non marcati, diluiti in serie (rispettivamente Ab00106-2.0 o Ab00106-2.3) o Alemtuzumab (Campath; controllo positivo). I dati mostrano chiaramente che l’anticorpo Fc Silent™, Ab00106-2.3, non si lega al recettore Fc umano.