Guinguette Marais Poitevin

METHODS

これは、カラチ（パキスタン）の人口におけるABH分泌者と非分泌者の状態を評価するために行われたクロスセクション研究です。 本研究では、15歳から40歳までの健康な成人学生111名（男性76名、女性25名）を無作為に抽出しました。 すべての人から書面によるインフォームド・コンセントを得た。 この研究は、カラチのBaqai Medical Universityの倫理委員会によって承認されました。 すべての人から10mlの唾液を滅菌済みの使い捨てプラスチック容器に採取した。 5mlの血液（2mlをEDTAチューブに、3mlを抗凝固剤の入っていないチューブに）を細胞と血清のグループ分けのために無菌的に全員から採取しました。

ABOとRhの血液グループ分けの手順：

3％赤血球懸濁液の調製。 EDTA凝固防止チューブに採取した2mlの血液を低速（1500rpm）で3分間遠心分離した。 血漿を別のチューブに移し、血清のグループ分けに使用した。 細胞を入れたチューブに生理食塩水を入れた。 チューブをよく混合し、1500rpmで3分間再遠心した。 洗浄の手順を2回繰り返した。 最後の洗浄では、チューブを高速（3000rpm）で3分間遠心分離し、上清を捨てた。 上澄み液が透明で、細胞の引き続いた線が見えれば、細胞の洗浄が適切に行われたことになる。

I: 細胞のグループ化。 清潔なガラス製試験管3本に、A管は抗A、B管は抗B、D管は抗Dとラベルを付けた。抗血清を1滴ずつ、A管には抗A血清、B管には抗B血清、D管には抗D血清を加えた。また、3％赤血球懸濁液を1滴ずつ、A管、B管、D管に加え、すべての内容物をよく混合した。 すべてのチューブを直ちに3400rpmで15秒間バランスを取りながら遠心分離した。

II: 血清のグルーピング。 血清は3000rmpで5分間遠心分離した後、抗凝固剤を入れていないチューブから分離した。 清潔なガラス製試験管3本に、A細胞用のチューブ「a」、B細胞用のチューブ「b」、O細胞用のチューブ「o」とラベルを付けた。 それぞれのチューブに2滴の個人血清を加えた。 A、BおよびO細胞の既知の3％赤血球懸濁液を1滴ずつ、チューブ「a」、「b」および「o」に加えた。 すべてのチューブの内容物をよく混合し、15秒間回転させた。

すべてのサンプルは6時間以内に同一人物の新鮮な赤血球を用いて検査されました。 唾液の採取と処理：すべての人から10mlの唾液を滅菌済みの使い捨てプラスチック容器に採取し、容器から滅菌済みの使い捨てガラス管に移した。 唾液の入ったチューブは2000rpmで10分間遠心分離した。 上澄み液を別のガラス管に移した。 唾液の上澄みを含むチューブを、唾液アミラーゼを不活性化するために56℃のウォーターバスに30分間入れました。 サンプルチューブを冷却し、2000rpmで10分間再遠心分離した。 上澄み液を別のディスポーザブル試験管に移し，赤血球凝集抑制試験または中和試験に用いた。

赤血球凝集抑制試験の原理。 液体（例えば唾液）中に可溶性の形で存在するABH物質は、対応する抗体を中和する。 この抗体は同じ抗原を持つ赤血球を凝集させることができなくなる11,12

血球凝集阻害試験の手順。

血液型抗血清の倍加希釈液の調製。 1:2（チューブ1）、1:4（チューブ2）、1:1024（チューブ10）のように、力価に応じてラベルを付けたラックに10本の試験管を入れた。 すべてのチューブに200マイクロリットルの生理食塩水を加えた。 チューブ1に、200μlの抗血清を加え、よく混合した。 200μlのチューブ1希釈液をチューブ2に移し、よく混合した。 同様の手順をチューブ2からチューブ10まで繰り返した。 200μlの希釈した抗血清をチューブ10から捨てた。 各チューブには同量の抗血清と生理食塩水が入っていた。

10本の試験管を3列に並べてラックに入れ、以下のようにラベルを付けた。

I列には血液型特異的抗血清の2倍希釈液を用意し、各チューブには1:2(チューブ1)、1:4(チューブ2)から1:1024(チューブ10)までの力価を表示した。 表-Iに示すように、各希釈液の100μlの血液型特異的抗血清を、II列およびIII列の対応するラベルの付いたチューブに移した。 100 μl の生理食塩水を II 列の各チューブに加えた。 III列目の各チューブには100μlの唾液を加えた。 II列およびIII列のすべてのチューブにキャップをし、よく混合した。 これらのチューブを、定期的に振盪しながら、水浴中で37℃で30分間インキュベートした。 インキュベーション後、3％群特異的赤血球懸濁液100μlをII列およびIII列の各チューブに加え、よく混合した。 すべてのチューブを37℃で30分間インキュベートした。 全てのチューブを良好な光源の下でマクロ的に凝集を観察した。

結果の解釈：

• Positive secretor status:

対照（II列）では高力価（1:128）、試験（III列）では低力価（1:16）の肉眼的凝集は、試験唾液中の血液型物質の存在を示している。

• 陰性分泌者の状態：

両列で目に見える凝集が見られる力価に差がないことから、唾液中に抗血清を中和する血液型特異的な物質がないことが示唆されました13

統計学的分析。 データ解析には、SPSS（Statistical package for social sciences）バージョン17を使用した。 記述統計学を用いて、頻度とパーセントを算出しました。