Fc Silent™ reprezentuje genetycznie zmodyfikowaną domenę Fc opracowaną przez Absolute Antibody do badań i rozwoju testów. Zawiera ona kluczowe mutacje punktowe, które znoszą wiązanie receptorów Fc (FcγR, FcR), znosząc funkcję efektorową cytotoksyczności skierowanej przeciwciałami (ADCC).
Nasze przeciwciała Fc Silent™ umożliwiają zatem badaczom usunięcie funkcji efektorowej in vivo i zmniejszenie niespecyficznego tła w metodach barwienia. In vivo, przeciwciała korzystają z długiego okresu półtrwania w osoczu (t1/2) związanego z domeną Fc, bez cytolitycznych mechanizmów immunosupresyjnych związanych z domeną Fc typu dzikiego. In vitro, przeciwciała mogą być stosowane w cytometrii przepływowej i immunohistochemii (IHC) w celu zmniejszenia niespecyficznego sygnału tła wynikającego z wiązania receptora Fc. Mutacje Fc Silent™ nie mają wpływu na inne właściwości przeciwciał, w tym na ich zgodność z przeciwciałami drugorzędowymi.
Wszystkie przeciwciała Absolute Antibody i białka fuzyjne są dostępne z domeną Fc Silent™. Nasz katalog odczynników zawiera domeny Fc Silent™ specyficzne dla poszczególnych gatunków, takich jak człowiek, mysz, królik, szczur i chomik, znajdujące się w magazynie i gotowe do zakupu. Jeśli nie widzisz wybranego przez siebie przeciwciała w formacie Fc Silent™, skontaktuj się z nami – z przyjemnością wyprodukujemy je dla Ciebie!
Aby uzyskać więcej informacji na temat wpływu receptorów Fc na funkcje efektorowe lub wysiłków w zakresie inżynierii Fc, sprawdź nasz Antibody Resource, bezpłatny internetowy zasób referencyjny dla badaczy.
Dane dotyczące wiązania Fc Silent™
Wiadomo, że izotypy mysiej IgG2a i szczurzej IgG2b silnie wiążą się z receptorami Fc niezależnie od swoistości przeciwciała testowego. Kontrole izotypów są stosowane, aby umożliwić badaczowi rozróżnienie pomiędzy specyficznymi i niespecyficznymi sygnałami tła. Na rycinie 1 pokazano, jak makrofagi myszy są znakowane prawie tak samo silnie przez kontrolę izotypu szczurzej IgG2b, jak przez anty-F4/80. Przełączenie na przeciwciała Fc Silent™ skutkuje uzyskaniem wiarygodnych danych z barwieniem tła nieodróżnialnym od kontroli tylko przeciwciałami drugorzędowymi. Pokazuje to również, że przeciwciała Fc Silent™ są kompatybilne ze standardowymi przeciwciałami drugorzędowymi.
Rycina 2 wykorzystuje rezonans plazmonów powierzchniowych (SPR) i bezpośrednią inhibicję kompetycyjną ELISA, aby pokazać, że format Fc Silent™ nie oddziałuje z receptorami Fc u myszy lub ludzi. Dane te zostały dostarczone przez dr Stephena Beersa z Uniwersytetu w Southampton.
Rysunek 1. Cytometria przepływowa BMDMs barwionych przeciwciałami typu dzikiego (A) i Fc Silent™ (B) anty-F4/80 (Ab00106-8.1 i Ab00106-8.4) i przeciwciałami kontroli izotypu, a następnie fluorescencyjnie sprzężonym kozim przeciwciałem wtórnym przeciw szczurom. Użycie Fc Silent™ eliminuje niespecyficzne barwienie wywołane przez FcγR, dzięki czemu dane są czystsze i dokładniejsze. Kliknij tutaj, aby uzyskać więcej informacji.
Rysunek 2A i B. Sensogram pokazujący wiązanie mysich przeciwciał monoklonalnych typu dzikiego i Fc Silent™ anty-F4/80 IgG2a (Ab00106-2.0 i Ab00106-2.3, odpowiednio) do unieruchomionych mysich receptorów Fcγ o niskim i wysokim powinowactwie (CD16, CD16-2, CD32, CD64). Analiza wiązania SPR Biacore pokazuje, że przeciwciało Fc Silent™ utraciło zdolność do interakcji z mysimi receptorami Fc.
Rysunek 2C i D. Sensogram pokazujący wiązanie szczurzych przeciwciał monoklonalnych typu dzikiego i Fc Silent™ anty-F4/80 (odpowiednio Ab00106-8.1 i Ab00106-8.4) do unieruchomionych mysich receptorów Fcγ o niskim i wysokim powinowactwie (CD16, CD16-2, CD32, CD64). Analiza wiązania Biacore SPR pokazuje, że przeciwciało Fc Silent™ utraciło zdolność do interakcji z mysimi receptorami Fc.
Rysunek 2E. Bezpośrednia inhibicja kompetycyjna ELISA. 2µg/ml/studzienkę ludzkiego rekombinowanego receptora FcγR1 (rCD64) zaadsorbowano na płytce 96-studzienkowej. 40µg/ml biotynylowanego alemtuzumabu (Campath) zmieszano wstępnie z nieznakowanymi, seryjnie rozcieńczonymi przeciwciałami monoklonalnymi mysimi typu dzikiego lub Fc Silent™ anty-F4/80 IgG2a (odpowiednio Ab00106-2.0 lub Ab00106-2.3) lub alemtuzumabem (Campath; kontrola pozytywna). Dane wyraźnie pokazują, że przeciwciało Fc Silent™, Ab00106-2.3, nie wiąże się z ludzkim receptorem Fc.