Abstract
Listeria monocytogenes est l’un des agents pathogènes d’origine alimentaire les plus courants. La viande et les produits de volaille sont parmi les principaux vecteurs de souches pathogènes de L. monocytogenes pour l’homme. Les produits à base de volaille font partie du régime alimentaire habituel des gens et, en raison de leur teneur en nutriments, de leur teneur plus élevée en protéines et de leur faible teneur en graisses, ils font l’objet d’une attention accrue. Par rapport à la viande rouge, la viande de volaille est plus économique. Elle a donc connu un taux de consommation plus important, notamment sous forme de barbecue dans lequel la croissance de la bactérie est favorisée. Le sous-typage des isolats de L. monocytogenes est essentiel pour les enquêtes épidémiologiques et pour l’identification de la source de contamination. Dans la revue suivante, les principales facettes de la présence de L. monocytogenes dans les volailles seront abordées. La plupart des sérotypes pathogènes de L. monocytogenes ont été détectés dans différents produits de viande de volaille. Malheureusement, ces agents pathogènes isolés présentaient parfois une résistance aux antibiotiques couramment utilisés pour le traitement des infections humaines.
1. Caractéristiques de Listeria monocytogenes
Listeria spp. sont de petits bâtonnets gram-positifs (0,5-4 μm de diamètre et 0,5-2 μm de longueur), non sporulés, anaérobies facultatifs, catalase-positifs et oxydase-négatifs. Listeria a une motilité tumultueuse à 20-25°C grâce à des flagelles péritriches. Sur la base des antigènes somatiques (O) et flagellaires (H), 13 sérotypes ont été identifiés dans Listeria monocytogenes (L. monocytogenes), notamment 1/2a, 1/2b, 1/2c, 3a, 3b, 3c, 4a, 4ab, 4b, 4c, 4d, 4e et 7 . Grâce à l’analyse PCR multiplex, quatre sérovars majeurs de souches de L. monocytogenes peuvent être classés en quatre sérogroupes distincts, IIa (sérovars 1/2a, 1/2c, 3a et 3c), IIb (1/2b, 3b, 4b, 4d et 4e), IIc (1/2c et 3c) et IVb (4b, 4d et 4e) en ciblant quatre gènes marqueurs. Les aliments ou l’environnement de production alimentaire sont couramment contaminés par les sérotypes 1/2a, 1/2b, 1/2c et 4b. La température optimale de croissance de L. monocytogenes est de 30-37°C, mais il peut survivre entre 0 et 45°C. Le L. monocytogenes peut se multiplier à la température des réfrigérateurs, il est résistant aux désinfectants et adhère à diverses surfaces. Une fois introduit dans les usines de transformation, il est capable de survivre et de rester pendant une longue période dans des conditions défavorables. Dans l’industrie alimentaire, le L. monocytogenes est capable de former un biofilm qui peut constituer une source potentielle de contamination. Le L. monocytogenes est un organisme largement répandu dans la nature, dont les principaux réservoirs sont le sol et le fourrage. De plus, il a été isolé d’humains et d’animaux sains ou d’animaux domestiques et sauvages infectés .
2. listériose
L. monocytogenes est la principale cause de listériose d’origine alimentaire chez les humains. Rarement, des infections d’origine alimentaire ont été signalées par L. ivanovii et L. seeligeri. Les souches de L. monocytogenes ont un potentiel pathogène différent, certaines souches étant très virulentes, tandis que d’autres sont des agents non infectieux. La détermination du potentiel pathogène de L. monocytogenes est importante du point de vue de la sécurité alimentaire et de la santé publique. L’identification des souches virulentes peut être réalisée en traçant certains gènes directement liés à la pathogénicité de L. monocytogenes. L. monocytogenes pénètre dans les cellules hôtes en utilisant une famille de protéines de surface appelées internalines, en particulier InlA et inlB. De plus, InlC et InlJ participent également aux étapes post-intestinales de l’infection par L. monocytogenes . Les internalines putatives de L. monocytogenes sont codées par les gènes inlC (lmo1786) et inlJ (lmo2821). L’organisme étiologique de la listériose humaine possède le gène inlJ (lmo2821). L. monocytogenes est porteur d’une toxine porogène appelée listériolysine O (LLO) (une protéine de 58 KDa codée par le gène hlyA) qui est vitale pour la virulence de la bactérie. LLO lyse la membrane de la vacuole et facilite finalement l’entrée de L. monocytogenes dans le cytoplasme. Plusieurs méthodes ont été utilisées pour évaluer la virulence du L. monocytogenes. Certaines d’entre elles comprennent le test de virulence chez la souris, la culture cellulaire et l’utilisation de gènes et de protéines spécifiques. Le tableau 1 présente quelques gènes spécifiques utilisés pour déterminer la virulence des isolats de L. monocytogenes chez la volaille.
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La listériose d’origine alimentaire présente trois caractéristiques cliniques principales, à savoir la méningite, la septicémie et l’avortement. Chez l’homme sain, elle peut provoquer une gastro-entérite fébrile, mais chez les personnes sensibles (enfants, personnes âgées, personnes immunodéprimées et femmes enceintes), elle peut entraîner une septicémie et une méningite .
La listériose est la quatrième zoonose la plus fréquente en Europe, avec une incidence annuelle de 0,41 cas pour 100 000 habitants . Dans les pays asiatiques, les rapports de listériose existent rarement en raison de l’échec de la détection ou de la déclaration. Cela peut également être dû à un taux d’incidence plus faible ou à l’exclusion de la listériose du diagnostic différentiel par les cliniciens. Cependant, L. monocytogenes a été considéré comme l’un des facteurs étiologiques des avortements spontanés et de la mortinatalité en Inde .
Les personnes âgées de plus de 65 ans et les nouveau-nés présentaient les taux les plus élevés d’infection par L. monocytogenes . La transmission maternelle aux nouveau-nés a été rapportée dans 79% des cas. La listériose présente le taux de létalité le plus élevé parmi les maladies d’origine alimentaire. L’isolement de L. monocytogenes à partir de différents types d’aliments RTE en a fait un pathogène alimentaire remarquable .
3. Sous-typage de L. monocytogenes
En raison des diverses souches de L. monocytogenes, le sous-typage des isolats pour la génétique des populations, le suivi des sources et l’enquête épidémiologique est crucial pour le contrôle et la prévention de la listériose. Le typage du L. monocytogenes est nécessaire pour identifier les sources de contamination et enquêter sur les épidémies de listériose d’origine alimentaire. Le sous-typage phénotypique et génotypique sont les deux principales méthodes utilisées par les chercheurs. En tant que méthode phénotypique, le sérotypage est généralement utilisé pour les souches de L. monocytogenes liées à des épidémies. En raison de l’implication de seulement trois sérotypes dans les épidémies de listériose et du faible pouvoir discriminatoire du sérotypage pour distinguer les sérotypes 4a, 4b et 4c, le sérotypage n’est pas suffisamment puissant pour le sous-typage de L. monocytogenes. C’est pourquoi les procédures de sous-typage basées sur la PCR, telles que l’amplification aléatoire de l’ADN polymorphe par réaction en chaîne de la polymérase (RAPD-PCR), la REP-PCR (Repetitive Extragenic Palindromes-PCR), la ERIC-PCR (Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus-PCR) et l’électrophorèse sur gel en champ pulsé (PFGE), gagnent en importance ces derniers temps. Le test RAPD amplifie certaines régions aléatoires dans les génomes de L. monocytogenes, ce qui génère des modèles distincts. La RAPD est plus rentable et plus rapide que les autres méthodes de typage, en particulier pour un faible nombre de souches. La technique RAPD-PCR est l’une des principales méthodes de caractérisation des souches bactériennes. L’ERIC-PCR (Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus-PCR) est une méthode très fiable, simple et économique, capable de produire une empreinte claire chez Listeria. L’analyse ERIC-PCR peut séparer les isolats du même sérotype. En outre, elle est capable de différencier les isolats de L. monocytogenes qui ont été détectés dans un échantillon avec un sérotype similaire .
Les polymorphismes de longueur de fragment de restriction (RFLP) ont amplifié un ou certains des gènes de maintien ou associés à la virulence (par exemple, hly, actA et inlA) de L. monocytogenes, puis digéré les produits PCR avec des enzymes de restriction . Elle nécessite un faible nombre de copies d’ADN pour réaliser l’expérience. Mais elle a un pouvoir discriminatoire plus faible et doit être utilisée avec d’autres techniques de sous-typage. Elle est également plus coûteuse que le test RAPD. L’une des autres méthodes de génotypage des isolats de L. monocytogenes est la méthode AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphisms). Dans la méthode AFLP, la digestion de l’ADN des isolats a été effectuée avec deux enzymes de restriction, notamment EcoRI, MseI ou TaqI. L’un des principaux avantages de l’AFLP est le pouvoir discriminatoire élevé de ce test. En revanche, l’écueil de cette méthode est la faible précision de la taille des fragments, ce qui entraîne une moindre reproductibilité .
La PFGE est un outil dans lequel, en exposant un grand fragment d’ADN à un champ électrique changeant, les isolats ont été sous-typés. Cette technique s’est avérée plus discriminante que l’AFLP, mais elle est plus longue, plus coûteuse et plus exigeante en main-d’œuvre par rapport à l’AFLP .
L. monocytogenes possède également certains éléments de séquence répétitifs dispersés de manière aléatoire, tels que les palindromes extragéniques répétitifs (REP) de 35-40 pb avec une répétition inversée. Ces régions fournissent quelques points utiles pour la distinction des souches d’isolats de L. monocytogenes. L’utilisation de la REP-PCR a permis d’identifier l’origine des isolats. Elle a un niveau de discrimination égal à la PFGE. Donc, il est suggéré comme une technique appropriée pour le typage rapide de ces isolats .
4. Listeria dans la volaille
4.1. Prévalence de Listeria Spp. et de L. monocytogenes dans la volaille
L’un des principaux véhicules de Listeria est constitué par les troupeaux de volailles qui peuvent propager l’organisme dans l’environnement et les carcasses de volailles en raison de pratiques non hygiéniques . Occasionnellement, Listeria a été isolée dans les fèces de volailles et de poulets. Des Listeria spp. ont été détectées dans divers produits de la volaille. Selon d’autres études, 8 % à 99 % des produits de volaille étaient contaminés par Listeria spp. .
L. monocytogenes a été précédemment signalé dans différents produits de volaille, des produits crus aux produits cuits . Schäfer et al. (2018) ont signalé que le taux de contamination des échantillons de poitrine et de cuisse de poulet était de 8,64 et 44,19 %, respectivement . 12,7 % de la viande de dinde était positive pour L. monocytogenes . Le tableau 2 montre le taux de contamination de la viande et des produits de volaille par Listeria spp. et L. monocytogenes.
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Selon le tableau 2, la viande de volaille et les produits crus étaient plus contaminés par L. monocytogenes que les produits cuits.
4.2. Sérotypes de Listeria monocytogenes dans la volaille
Les sérotypes 1/2b et 3b (sérogroupe IIb) de L. monocytogenes étaient les sérotypes isolés prédominants (52,77%) dans les carcasses de poulet en Iran, et le sérogroupe IVa qui contient les sérotypes 4a et 4c a également été détecté dans 27,77% des carcasses de poulet . Le sérotype le plus courant dans les produits de volaille aux États-Unis était le même. Mais dans une autre étude, le sérotype 4b a été rapporté comme le sérotype le plus commun dans les produits de volaille qui a été détecté dans 44,9% des échantillons, tandis que la prévalence du sérotype 1/2b était de 10,2% .
La prévalence du sérogroupe IVb était de 2,77% et 12,5% dans les carcasses de poulet et les aliments RTE, respectivement . La listériose humaine est principalement causée par les sérovars 1/2a, 1/2b et 4b de L. monocytogenes. Cependant, le sérotype 4b n’était pas couramment trouvé dans les aliments .
Les échantillons de viande de dinde emballée fraîche étaient contaminés par les sérotypes de L. monocytogenes comme suit : 4b (ou 4d, 4e) (51,4 %), 1/2a (ou 3a) (27,0 %) et 1/2b (ou 3b) (21,6 %) . Cependant, le sérotype 4b a été fréquemment isolé de la viande et des cuisses de dinde, tandis que le 1/2b était prévalent dans les échantillons de poitrine de dinde .
Environ 16,66 % des carcasses de poulet échantillonnées en Iran étaient contaminées par le sérogroupe IIa contenant les sérotypes 1/2a, 3a, 1/2c et 3c . Une autre étude sérologique sur des produits de volaille a signalé la présence du sérotype 1/2a dans 40,8 % des échantillons et du sérotype 1/2c dans 4,08 % d’entre eux. Dans d’autres études, le sérotype 1/2a était le sérotype prédominant dans les produits de volaille du Portugal et de l’Estonie, tandis que le sérotype 1/2c était le plus important en Finlande. Les sérogroupes identifiés dans les aliments PAM étaient 1/2a, 3a et 1/2c, 3c avec un taux de 65,6% et 21,9%, respectivement. Sur la base des études ci-dessus, la viande de volaille est une source potentielle de sérotypes pathogènes de L. monocytogenes.
4.3. Sensibilité aux antimicrobiens de Listeria monocytogenes
Listeria spp. est résistante aux agents antimicrobiens en raison d’éléments génétiques mobiles répandus et de transposons conjugatifs . Douze des 36 isolats de L. monocytogenes étaient sensibles à 11 agents antimicrobiens testés . Aucun des isolats ne présentait de résistance à l’ampicilline et à la vancomycine . Certains chercheurs ont observé une résistance à l’ampicilline dans les isolats de L. monocytogenes, mais tous leurs isolats étaient sensibles à la vancomycine . Zeinali et al. (2017) ont observé une résistance à l’érythromycine chez 52,77% des isolats de L. monocytogenes mais, dans une autre étude, elle a été rapportée chez 15,2% des isolats . 8 des 23 isolats de L. monocytogenes présentaient une résistance à l’érythromycine. La résistance à la pénicilline est un résultat commun à un certain nombre d’études. En outre, une forte sensibilité de L. monocytogenes à l’ampicilline et à la pénicilline est également signalée. La tétracycline est un agent antimicrobien fréquemment utilisé dans les élevages de volailles et également pour le traitement des infections humaines. La résistance à cet agent est toujours observée chez L. monocytogenes. Un faible nombre d’isolats étaient résistants à la gentamycine. Le traitement standard de la listériose consiste à utiliser l’ampicilline ou la pénicilline G en association avec un aminoglycoside tel que la gentamicine. La deuxième ligne de traitement est le triméthoprime. La résistance au triméthoprime chez L. monocytogenes provient du plasmide pIP823. Il existe une forte sensibilité à cet agent parmi les isolats de L. monocytogenes provenant des aliments. La plupart des isolats de L. monocytogenes présentent une multirésistance aux médicaments. Heureusement, ils sont surtout sensibles aux antibiotiques d’usage courant qui étaient utilisés pour guérir la listériose humaine.
4.4. Typage des isolats de L. monocytogenes chez la volaille
Les isolats de L. monocytogenes présentant le même cluster RAPD appartenaient à des sérogroupes différents . Quatre clusters différents ont été distingués parmi 26 isolats de L. monocytogenes provenant de carcasses de poulet par l’analyse RAPD avec trois amorces différentes, à savoir OPM-01, HLWL 74 et D8635 . Ces 26 isolats de L. monocytogenes présentaient 16 modèles d’antibiogramme .
L. monocytogenes isolés avec des types d’impulsion similaires ont été classés dans le même cluster dans l’analyse RAPD. Ils étaient également apparentés de manière clonale . Différents laboratoires ont utilisé le test RAPD pour le sous-typage des isolats de L. monocytogenes , y compris des isolats provenant de différentes usines de transformation de la volaille .
Plusieurs isolats d’aliments prêts à consommer ont été typés par RAPD, bien qu’ils n’aient pas été distingués par REP-PCR . Vingt-huit isolats de L. monocytogenes provenant de viande de poulet présentaient 27 types RAPD. Ils étaient résistants à trois agents antimicrobiens ou plus .
Quinze isolats de L. monocytogenes provenant de canards présentaient trois modèles d’antibiogramme, cinq clusters RAPD et trois singletons. Ainsi, la RAPD avait un pouvoir plus élevé pour distinguer les isolats .
Les isolats de L. monocytogenes de poulets et d’humains ont été classés en cinq clusters dans le test RAPD . Tous les isolats humains ont été classés dans un seul cluster . Ces isolats avaient des sérogroupes différents . C’est un résultat commun à d’autres études. Cela peut être dû à l’amplification de loci non spécifiques dans le test RAPD. La plupart des similitudes génétiques ont été observées parmi les isolats qui avaient une zone d’échantillonnage commune. Le même groupe RAPD a été observé dans certaines souches de Lactobacillus provenant d’une source commune. Le pouvoir de discrimination du test RAPD est plus élevé que celui du sérotypage. Les isolats dans le même profil RAPD avaient différents sérotypes et ont été détectés dans différentes zones .
29 isolats et 5 souches de référence de L. monocytogenes ont été regroupés en 4 clusters et 1 singleton par REP-PCR . Il y avait une grande diversité génétique parmi les isolats. Selon Shi et al. (2015), les isolats appartenant au même sérotype et à la même origine avaient le même cluster en REP-PCR. 15 isolats de L. monocytogenes provenant de canards et de leurs environnements ont été typés par RAPD et REP. Ils ont été classés en 5 clusters et 3 singletons, et 2 clusters et 3 singletons, respectivement. Cette découverte a permis de confirmer l’adéquation de ces outils pour la discrimination des souches. Soni et al. (2012) ont également observé que les isolats cliniques de L. monocytogenes avaient des empreintes ERIC et REP similaires, mais étaient très différents des isolats d’eau et de lait . Oliveira et al. (2018) ont trouvé 12 pulsotypes parmi 38 isolats de L. monocytogenes . 40 isolats de L. monocytogenes ont produit 10 profils d’empreintes différents dans l’ERIC-PCR. Des empreintes similaires ont été observées pour les isolats d’un même échantillon, mais il y avait deux souches dans un échantillon avec des empreintes différentes. L. monocytogenes avait une grande diversité génétique, et pour une bonne différenciation des isolats, l’utilisation d’au moins deux approches de sous-typage est nécessaire.
5. Conclusion
En conclusion, du point de vue de la sécurité alimentaire, la présence de L. monocytogenes dans la viande et les produits de volaille constitue un danger potentiel à multiples facettes. Cela est dû, d’une part, à certains aliments cuits au barbecue et frits à base de viande de poulet qui peuvent entraîner la survie de L. monocytogenes dans les produits finaux et, d’autre part, à la présence d’isolats multirésistants qui transmettent la résistance aux antibiotiques à la communauté. De plus, certains des isolats étaient des sérotypes pathogènes qui jouent un rôle majeur dans les épidémies de listériose humaine. Les données de sous-typage ont révélé la nature hétérogène des isolats de L. monocytogenes. La RAPD, la REP-PCR et l’ERIC-PCR ont un pouvoir discriminatoire considérable et sont rentables et moins fastidieuses et chronophages.
Conflits d’intérêts
Les auteurs déclarent qu’il n’y a pas de conflits d’intérêts.